第９回　技術講座「遺伝子診断のいろは」（７）

【診断応用】

　ＤＮＡ診断では、以上述べた遺伝子異常の内、ＤＮＡとｍＲＮＡの変化を検索します。ＤＮＡレベルではサザンブロットハイブリダイゼーション。研究的には異常領域のクローニングとシーケンシングが行われます。皆さんがサザンブロットで何か異常を見つけたら、そちらに走っていくのも一つの方法です。教科書の１行となるかもしれません。また、ＰＣＲを使い異常領域の増幅をした後の解析も可能です。ｍＲＮＡの解析はノーザンブロットハイブリダイゼーションやドットブロットまた、ＲＴ−ＰＣＲなどがあります。

　本日は、基本中の基本のサザンブロットについて、実験操作法と解釈について説明をします。細かな実験条件は省略し、各段階の注意点を挙げていきます。


Ｉ．ＤＮＡの抽出(1)
　
　遺伝性の異常の検索にはリンパ球ＤＮＡが用いられます。癌の遺伝子異常を解析するのなら癌組織からＤＮＡを抽出します。基本は蛋白変性後のＤＮＡ精製です。リンパ球からＤＮＡを抽出する過程を示します。
　写真のごとくフィコールの上に、全血を乗せてクッションにして遠心すると赤血球と顆粒球が下に落ちて、中間層に単核球がきます。そして上が血清です。
単核球を回収し、ＤＮＡの原材料とします。なおこの分画はリンパ球が多いので以後リンパ球からのＤＮＡ抽出と称します。プロナーゼやプロテースＫなどの強力な蛋白分解酵素で蛋白を分解し、フェノールにより変成蛋白を除きます。


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